선형 TOF를 이용한 손상되지 않은 단백질의 고감도 분석
엠에스팁 227호
개요
JMS-S3000 SpiralTOFTM 17m의 독특한 비행 경로를 통해 현재 사용 가능한 최고 분해능의 MALDI-TOFMS 시스템을 제공합니다. 그러나 수명이 매우 짧거나 비행 중 자발적으로 해리되는 이온은 SpiralTOF(또는 기존 반사 TOF)로는 검출할 수 없습니다. 이러한 문제를 해결하기 위해 선형 TOF 옵션이 포함된 SpiralTOF를 사용하여 손상되지 않은 단백질을 고감도 분석할 수 있습니다.
이 연구에서는 JEOL SpiralTOF 시스템의 선형 TOF 옵션을 사용하여 손상되지 않은 단백질을 측정하는 방법을 보여줍니다.
실험
단백질 표준은 Sigma-Aldrich에서 구입했습니다.
펩신(돼지 위 점막), P-6887
알부민(소혈청), A8471
코날부민(닭고기 달걀 흰자), C0755
IgG(우혈청), I5506
단백질 표준 시료는 1 pmol/µL의 농도로 물에 용해했습니다. 시나핀산(SA)을 매트릭스로 사용하여 1% 트리플루오로아세트산을 함유한 물/아세토니트릴(1:0.1)에 용해했습니다. 다음으로, 단백질 표준 용액과 SA 용액을 부피비로 1:1로 혼합했습니다. 이 혼합물 0.5μL를 MALDI 타겟 플레이트(250 fmol/spot)에 넣었습니다. 마지막으로, 건조된 시료는 JMS-S3000 SpiralTOF에서 제공하는 선형 TOF 옵션을 사용하여 측정했습니다.TM MS 시스템.
그림 1. 스파이럴TOF 선형 TOF 옵션 포함
그림 2. 단백질 표준의 MALDI 질량 스펙트럼, (a) 펩신(250 fmol/spot),
(b) 알부민(250 fmol/스팟) (c) 코나알부민(250 fmol/스팟), (d) IgG(250 fmol/스팟).
결과 및 논의
각 단백질 샘플의 MALDI 질량 스펙트럼은 그림 2에 나와 있습니다. 단일 전하 및 이중 전하 양성자화 분자에 해당하는 피크가 예상된 지점에서 관찰되었습니다. m / z 이들 단백질의 1차 구조에 대한 값.
Linear TOF 옵션이 포함된 SpiralTOF 제공
높은 피크 모양이 좋습니다 m / z 지방
이 농도(250 fmol)에서 이 샘플의 신호 대 잡음비가 우수합니다.
JEOL JMS-S3000 시스템을 사용하여 손상되지 않은 단백질에 대한 고품질 질량 스펙트럼을 얻을 수 있었습니다. 또한, 선형 TOF는 최대 m / z 500,000(이 예시에서는 데이터가 표시되지 않음).
