JMS-S3000 "SpiralTOF™-plus 2.0"을 이용한 올리고뉴클레오티드 분석
엠에스팁 364호
개요
뉴클레오타이드는 염기와 당으로 구성된 뉴클레오사이드에 인산기가 결합된 화합물로 디옥시리보핵산(DNA)과 리보핵산(RNA)의 빌딩 블록이다. 핵산 의약품은 그 동안 치료가 어려웠던 질병의 치료제로 주목받고 있으며, 2022년 16월 현재 일본, 미국, EU에서 XNUMX종의 핵산 의약품이 승인되었습니다.1). 최근에는 합성 올리고뉴클레오티드가 핵산 의약품으로 활용되고 있다. 합성된 올리고뉴클레오티드의 분자량 확인은 의약품의 품질 관리에 중요합니다. 본 보고서에서는 합성된 올리고뉴클레오티드(표 1)를 시료로 사용하여 MALDI-TOFMS로 측정하였다.
표 1) 합성된 올리고뉴클레오티드의 염기서열 및 m / z 값.
| 순서 | 최저 m / z [M+H]의 값+ | 평균 m / z [M+H]의 값+ |
|---|---|---|
| 5'-CGCTAAGTACGCAATGGGCC-3' | 6125.0710 | 6127.9928 |
측정 조건
매트릭스 3-HPA(3-하이드록시피콜린산)를 20mg/mL 50% AcN(20mM 시트르산이암모늄 수용액)으로 제조하였다. 합성된 올리고뉴클레오티드의 50μM 수용액을 시료로 사용하였다. 매트릭스 용액과 시료 용액을 5:1(v/v)로 혼합한 후 타겟 플레이트에 점적하고 공기 중에서 건조시킨 후 Linear TOF 모드(양이온 모드)와 SpiralTOF 모드(양이온 모드)로 측정했습니다. .
결과 및 요약
그림 1은 Liner 및 Spiral TOF 모드의 측정 결과를 보여줍니다. 두 모드 모두에서 올리고뉴클레오타이드의 양성자화된 분자가 가장 강렬한 피크로 관찰되었으며, 나트륨 이온 부가물도 관찰되었습니다. Linear TOF 모드에서는 낮은 질량 분해능으로 인해 동위원소 피크의 분해가 어려우나 SpiralTOF 모드에서는 약 40,000의 질량 분해능을 얻었으며 동위 원소 패턴이 명확하게 관찰되었습니다. 시뮬레이션된 동위원소 패턴(그림 2a)과 측정된 질량 스펙트럼(그림 2b)을 비교하면 동위원소 피크 패턴이 잘 일치합니다. 단일동위원소 피크의 질량오차는 외부표준법으로 -6.4mDa(-1.0ppm)로 확인되었다.
위에서 설명한 것처럼 JMS-S3000 "SpiralTOF™-plus 2.0"은 핵산 분석에 매우 효과적인 분석 도구인 것으로 나타났습니다.
그림 1 LinearTOF 모드(b) 및 SpiralTOF 모드(a)의 질량 스펙트럼.
그림 2 이론적 동위 원소 패턴(a)과 [M+H]의 얻어진 동위 원소 패턴 비교+(비).
참조
1) 분자표적 및 유전자치료제 분과 웹사이트, 국립보건과학연구소, 일본
(https://www.nihs.go.jp/mtgt/pdf/section2-1.pdf)
인정
전기통신대학 Masumi Taki 교수의 샘플 제공
